Muestras Histológicas o Histotecnia.
En la siguiente entrada hablaremos más de la histología y algunas de sus tantas técnicas histologicas que se aplican al realizar muestras para el estudio de los tejidos tanto sanos o con sospechas de alguna anomalía. En el extenso mundo de la histología te lo explicamos paso a paso.
¿Qué son y cómo hacerlas?
¿Qué son muestras histológicas?
son finalmente visualizadas utilizando un instrumento de luz conocido como microscopio para ser observadas y analizadas.
Según Núñez, C. : "El proceso histológico es una serie de métodos y técnicas utilizados para poder estudiar las características morfológicas y moleculares de los tejidos" (Page. 4)
¿Cómo hacerlas?
Se puede estudiar el proceso histológico planteando una serie de pasos para el mejor estudio y aprovechamiento de los mismos, a continuación enumerando cada uno de ellos los describiremos utilizando los pasos para la inclusión en parafina:
- Obtención de los la muestra: Se hace un corte del tejido seleccionado para estudiar ya sea de una necropsia o de un animal vivo, de 0,5 cm que no sobrepase 1 cm, se recomienda identificar al hacer la obtención de la muestra y hacer varios cortes tanto del tejido que se sospeche alguna anomalía como de tejido sano para la comparación final al estudio.
- Fijación de la muestra: Existen dos tipos de fijadores químicos como por ejemplo el formol al 10% (Formaldeido) y físicos pero estos deforman aun más la estructura física de la muestra que los químicos que suelen mantenerla mucho más con el buen uso de la misma.
- Deshidratación: Esto se hace mediante con la batería de alcohol, esta comprende de cuatro envases con distintas dosis de alcohol, (10% - 50% - 70% - 100%) que al hacerlo de forma decreciente se deshidrata la muestra, el tiempo de duración al ser sumergidas en la batería dependerá de qué tipo de tejido se esté trabajando.
- Diafanización o Aclaramiento: Se utiliza la batería de Xilol que comprende de tres envases en los cuales se sumergirá la muestra después de ser deshidratada, si la muestra al ser sumergida se colora a un tono blanquecino quiere decir que la muestra no está bien deshidratada.
- Inclusión en parafina: Se hace utilizando una estufa para calentar la parafina que será utilizada para la inclusión ya que está en estado ambiente en sólida, la temperatura que se utiliza entre 45 a 50 Grados Centígrados. La muestra se sumerge durante unos segundos.
- Formación del Bloque de Parafina: Las herramientas que se utilizan para la formación del bloque de parafina es una dispensador de parafina y las barras de Leuckart, luego se deja enfriar a temperatura ambiente o utilizar algún otro medio para hacer que se endurezca a mayor velocidad.
- Corte del Bloque de Parafina: Al terminar de endurecerse el bloque de parafina se prosigue a ser desmoldado y utilizando un microtomo se corta en pequeñas y finas láminas, el microtomo realiza cortes de 5 a 8 micrómetros.
- Bandeja de Flotación o Baño Maria: Es una bandeja utilizada para quitar el exceso de parafina de la muestra y poder separar un corto del otro ya que al realizarlos estos pueden llegar a pegarse uno al otro, la bandeja de flotación tiene una temperatura de 45 Grados Centígrados. Luego se hace la pesca de la muestra que es con el porta objeto alcanzar la muestra.
- Desparafinar e Hidratar: Se desparafina utilizando la batería de Xilol nuevamente y la batería de alcohol de forma decreciente.
- Coloración de la Muestra: Mediante la Eosina que colora el núcleo de las células y la Hematoxilina que colora el citoplasma, la muestra para poder ser finalmente observada en el microscopio y poder identificar cada una de sus estructuras.
- Deshidratación y Montaje: Finalmente se deshidrata nuevamente con la batería del alcohol y se hace el montaje para la observación.
Esquema de la histotecnia.
Video: Procedimiento histológico de muestras biológicas.
Fuente:
Referencias Electrónicas
Nuñez, C. : https://upload.wikimedia.org/wikipedia/commons/8/85/LIBRO_TEXTO_IPP_HISTOLOGIA.pdf Consulta: 04/09/2017
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